1.定義：是以RNA為模板，聯(lián)合逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數(shù)細胞中少于10個拷貝的RNA模板。

　　RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導(dǎo)下和逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成雙鏈靶DNA， 最后擴增靶DNA。

　　2.檢測方法

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　　利用同一緩沖液，在同一體系中加入逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP直接進行mRNA反轉(zhuǎn)錄與PCR擴增。Taq酶不僅具有DNA多聚酶的作用，而且具有反轉(zhuǎn)錄酶活性，可利用其雙重作用在同一體系中直接以mRNA為模板進行反轉(zhuǎn)錄和其后PCR擴增，從而使mRNA的PCR步驟更為簡化。所需樣品量減少到最/低限度，臨床小樣品的檢測非常有利。用一步法擴增可檢

　　測出總RNA中小于1ng的低豐度mRNA.該法可用于低豐度mRNA的cDNA文庫的構(gòu)建及特異cDNA的克隆，并有可能與Taq酶的測序技術(shù)相組合，使得自動反轉(zhuǎn)錄、基因擴增與基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的測序在單管中進行。

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　　由于單管反應(yīng)時RT和PCR都不能在最佳條件下進行并且 容易相互干擾，常只適宜用基因特異引物擴增較短的基因，及定量PCR.兩步法則是將RT和PCR分別進行，這樣使得兩個反應(yīng)充分發(fā)揮各自的特點，更為靈活而且嚴謹，適合那些GC含量、二級結(jié)構(gòu)嚴重的模板或者是未知模板，以及多個基因的RT-PCR。